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T4 DNA聚合酶(T4 DNA Polymerase)是一种模板依赖的DNA聚合酶，可以在单链DNA模板和与其配对的引物存在的条件下，催化5'→3'方向的DNA合成。T4 DNA Polymerase具有3'→5'外切酶活性，但不具有5'→3'外切酶活性。

T4 DNA聚合酶具有比DNA聚合酶I更强的3'→5'核酸外切酶活性，因此该酶是高保真的DNA聚合酶；与大肠杆菌DNA聚合酶I不同的是，T4 DNA聚合酶不具有5'→3'核酸外切酶活性。

T4 DNA聚合酶由于同时具有5'→3'DNA聚合酶活性和3'→5'DNA外切酶活性，可以用于将5'端突出末端补平或3'端突出末端削平。T4 DNA Polymerase的3'→5'DNA外切酶活性对于单链DNA要比双链DNA活性更高，即单链DNA要比双链DNA中的非配对链部分更容易被T4 DNA Polymerase所消化。T4 DNA Polymerase的3'→5'外切酶活性比Klenow Fragment要高约上百倍。

• DNA 5'或3'突出末端的平滑化和平端克隆。
  
• 通过置换反应进行标记DNA探针合成。
  
• 定点突变过程中第二链的合成。
  
• 不依赖于连接反应的PCR产物克隆。
  
• 通过引物延伸法分析mRNA转录的起始点。

T4 DNA聚合酶由大肠杆菌表达纯化而来，表达基因为T4噬菌体基因43。


一个单位是指在37℃下，30分钟内将10nmol dNTP掺入到酸不溶物中所需的酶量。

组分	150U	750U	3000U
T4 DNA聚合酶(3U/μL)	50μL	250μL	1mL
10×T4DP Reaction Buffer	300μL	1.5mL	6mL

保存：-20℃


100mM磷酸钾(pH6.5)，1mM DTT，50%甘油。


10×T4DP Reaction Buffer：
100mM Tris-HCl (pH7.9@25℃)，500mM NaCl，100mM MgCl₂，10mM DTT。


不含DNA内切酶，不含RNase。


75℃加热20min可使T4 DNA聚合酶充分失活；金属离子螯合剂可以抑制T4 DNA聚合酶的活性。

• 由于该酶具有3'→5'核酸外切酶的活性，反应温度的提高、过量酶的使用、没有加入dNTP或反应时间过长都可能造成DNA 3'末端碱基被切除而形成凹端。
  
• 酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

图1.本制品催化5'端突出末端补平的效果图。使用本制品或N公司的T4 DNA Polymerase，在20μL反应体系中加入图中指定量的本制品或N公司的T4 DNA Polymerase，12℃孵育15min进行反应，反应完毕后冰浴3～5min，75℃孵育20min以终止反应。取5μL反应产物，加入1μL 6×DNA Loading Buffer，然后进行15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。180V电泳60min，之后用NadRed红色核酸染料室温染色15min，观察实验结果。如图所示，本制品与N公司的竞品相比，具有类似的催化效果。反应体系(20μL)：10mM Tris-HCl (pH7.9 at 25℃),50mM NaCl,10mM MgCl₂,1mM DTT,125μM dNTP Mix,0.5μM Template/Primer (Template:5'-ATACATAGATACATAGACTGGCCGTCGTTTTAC-3'；Primer:5'-GTAAAACGACGGCCAGT-3')；Primer和Template按照DNA寡核苷酸退火缓冲液产品说明书中推荐的程序进行退火反应，之后以Primer/Template退火产物为底物，进行5'端突出末端的补平。

• DNA 5'或3'突出末端平滑：
  
  • Template/Primer杂合双链的退火：
    将单链DNA Template和Primer等摩尔数混合，推荐的终浓度为10μM，90℃孵育1分钟，然后通过梯度降温至25℃退火形成Primer/Template杂交双链。推荐使用DNA寡核苷酸退火缓冲液，并按照该产品使用说明进行退火反应。退火后形成的双链可以在-20℃保存。
    
  • 参考下表在冰浴上设置如下反应体系：
    

    成分	用量	终浓度
    Nuclease-Free Water	(16.67-x)μL	-
    5'and/or 3'overhang dsDNA	xμL	0.5μM or 0.05μg/μL
    10×T4DP Reaction Buffer	2μL	1×
    dNTP Mix (2.5mM each)	1μL	125μM
    T4 DNA聚合酶(3U/μL)	0.33μL	0.05U/μL
    总体积	20μL	-

    • 如果同时进行多个反应，可以把上表中除5' and/or 3'overhang dsDNA之外的所有溶液和酶预混合，然后再分装到各反应管。如果是普通的双链DNA末端酶切后的补平和打平，可以使用上表中的推荐酶量；如果是用于较长的DNA片段的合成，推荐把酶量加大约3倍左右。
  • 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
    
  • 反应条件：12℃孵育15分钟或室温(25℃)孵育5分钟。
    
  • 终止反应：75℃孵育20分钟或加入终浓度为10mM的EDTA以终止反应。
• 其他用途请自行参考T4 DNA Polymerase的相关文献资料进行。

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